1. Diferencias entre distintos grados de reactivos de cloroformo.
Según la literatura, utilizamos cloroformo como disolvente para preparar muestras para la determinación de la rotación específica de este compuesto. Naturalmente, utilizamos reactivos de grado analítico (AR). Sin embargo, cuando nuestros datos mostraron una gran diferencia con los del cliente, utilizamos reactivos de cromatografía (HPLC) de mayor calidad para volver a preparar la muestra y observamos que la rotación específica del compuesto era mucho mayor que los datos originales. Considerando que el cloroformo puede oxidarse por la luz para producir cloruro de hidrógeno (HCl), que a su vez afecta al compuesto, medimos el valor de pH del reactivo de cloroformo y no encontramos ningún problema. Finalmente, verificamos el COA del cloroformo y observamos que los reactivos de cloroformo de grado AR contienen cierta cantidad de etanol (estándar doméstico 0,3%-1%) para garantizar la estabilidad del cloroformo, mientras que el contenido de etanol en los reactivos de cloroformo de grado HPLC doméstico no está indicado, por lo que creemos que es del 0%. La idea general es que una cantidad tan pequeña de etanol no tendrá un gran impacto en la determinación de la rotación específica. Sin embargo, nuestros resultados experimentales muestran que la rotación específica del mismo compuesto en solvente AR y solvente HPLC tiene un error de más del 6%. Para este fin, añadimos diferentes cantidades de etanol al reactivo de cloroformo de grado AR y luego realizamos una serie de pruebas de rotación específicas en el compuesto. Descubrimos que el contenido de etanol en cloroformo tuvo una gran influencia en la rotación específica del compuesto, como se muestra en la Figura 1.
El mismo compuesto obtuvo rotaciones específicas de 116,64 y 124,36 en solvente AR y solvente HPLC, respectivamente. Esto muestra que en el reactivo de cloroformo de grado HPLC, el contenido de etanol se determina básicamente como o cercano al 0%, y el reactivo de grado AR que utilizamos contiene aproximadamente 0,75% de etanol. Diferentes compañías pueden utilizar niveles específicos de reactivos para configurar las muestras de prueba de acuerdo con sus propios procedimientos operativos estándar. Esto debe aclararse y verificarse durante la comunicación entre compañías.
Tabla 1 Relación entre la rotación óptica específica y la proporción de etanol en el disolvente
(No incluye el contenido de etanol en el reactivo cloroformo de grado AR)
Figura 1 Relación entre la rotación óptica específica y la proporción de etanol en el disolvente
(No incluye el contenido de etanol en el reactivo cloroformo de grado AR)
2. La diferencia entre filtrar y no filtrar
Durante esta investigación, también descubrimos que las pequeñas partículas flotantes en la solución, invisibles a simple vista, tienen un gran impacto en la estabilidad de la prueba de rotación óptica. Tras filtrar la muestra con una membrana de filtro orgánico de 0,22 µm, los resultados de la prueba son completamente consistentes dentro de los 3 decimales de los datos de prueba proporcionados por el instrumento, lo que demuestra una repetibilidad extremadamente alta.
Tabla 2 Diferencias en los resultados de rotación específica entre disolventes de cloroformo de grado HPLC y de grado AR
Tabla 3 Diferencias en los resultados de rotación específica causadas por filtrar y no filtrar soluciones de muestra (mismo solvente)
Figura 3 Diferencia en la rotación específica causada por filtrar y no filtrar la solución de muestra (mismo solvente)
Conclusión
La aparición e investigación de este problema nos hizo comprender mejor que, al formular las condiciones de prueba, no solo debemos utilizar reactivos y productos químicos de alta calidad, sino también comprender en detalle y adecuadamente los materiales y elementos utilizados, incluidos los reactivos, e indicarlos en los procedimientos operativos para garantizar la obtención de los mejores resultados con alta repetibilidad y precisión en condiciones de prueba razonables.
Nota: El polarímetro utilizado en este artículo es AUTOPOL I, un polarímetro automático de Rudolph Research Analytical, EE. UU., con un control de temperatura de 20 °C.
